Streaking 실험보고서 - streaking silheombogoseo

미생물학실험보고서 2차

1. 실험일자 |2017.03.16

2. 실험자 | 미생물1조

3. 실험제목 |세균 접종 및 분리배양

4. 실험목표 | 도말 평판 배양법(streak plate method)을 이용하여 대장균을 순수 분리 배양한다.

5. 실험준비물 |
균주(E.coli), 시험관, 페트리접시, agar, 백금이, 멸균생리식염수, 항온기, 배지, 인큐베이터, inoculating loop, 알코올램프, 라이터, 코니칼튜브, shaking incubator, para film

6. 실험원리 |
배지의 미생물을 증식시키는 것을 배양이라 한다. 두 종류 이상의 균을 함께 배양하는 것을 혼합배양이라고 하며, 한 종의 균만을 배양하는 것을 순수배양이라고 한다. 자연계에는 많은 미생물들이 섞여 존재하므로 원하는 특정 균을 얻고자 할 때에는 다른 균으로부터 필요한 균 만을 따로 분리하여 순수 배양하여야 한다. 일반적으로 고체 평판 배지를 이용해 colony를 만들어 이것을 선택하여 순수 배지에 옮긴다.

*도말 평판 배양법(spread plate method)
한천 배지를 부어 멸균된 페트리 접시에 평판을 만들어 굳힌 다음 중앙에 소량의 액상 시료를 넣고 유리막대로 펼친다. 페트리 접시는 배양하기 전에 1~2시간 정도 건조시키고, 획선 평판법이나 도말 평판법으로 얻는 colony들은 표면 colony로서 colony의 형태나 gram염색 재료를 사용할 수 있다. 또한 순수 분리를 위해 특정 colony를 분리 배양할 수 있다.

*혼합 평판 배양법(pour plate method)
미생물 시료를 연속적으로 희석시킨 후에 시료의 일부를 굳기 전의 고체 배지에 혼합하여 평판 접시에 함께 부어 굳힌다. 용액 내의 세균 수를 측정하거나 세균을 순수 분리하는데 쓰이며 주로 수질검사에 많이 이용한다. 일반적으로 평판배지법에 의한 균의 순수분리는 호기성 균이나 특정 호기성 균에 적합하고 혐기성 균을 순수 분리하기 위해서는 산소가 제거된 특수 용기를 사용하여야 한다. 보통은 평판배지법에 의해 분리된 colony는 단일균종이라고 할 수 있지만 경우에 따라 오염될 가능성도 있으므로 분리된 colony는 액체 배지에 혼탁 시킨 후 고체 배지에 같은 조건으로 반복하여 순수분리 하여야 한다.

*획선 평판법(streak plate method)
분리배양 하고자 하는 미생물의 시료를 백금에 묻혀 고체 평판 배지의 한 쪽에서부터 S자 형으로 가볍게 그어 배지 전면에 획선을 긋는 방법이다. 획선 시작부위는 미생물의 수가 많지만 획선 마지막 부분에서는 미생물의 수가 1ml당 1~2가 되도록 한다. 항온기에서 37℃에서 18~24시간 배양한다. 일반적으로 균을 분리하는데 널리 쓰이는 방법이다.

-고체 배양법
종균의 보존, 생태 및 생리의 관찰에 이용하며 사면 배양법과 천자 배양법이 있다.

*사면배양
호기성균의 배양에 이용된다. 백금선으로 종균을 취해 사면 위에서 밑에서 위로 직선 또는 지그재그로 선을 긋는다. 세균은 보통 백금선을 사용하며, 효모는 백금이를, 곰팡이는 백금구를 사용한다.

*천자배양
젤라틴 같은 고체 배지에 미생물이나 세균을 배양할 때 곧게 뻗친 백금선의 끝에 균을 묻혀 배지 속 깊이 찔러 넣어 배양하는 법으로 혐기성 세균의 배양에 이용한다.

7. 실험방법 |
*고체배지의 접종, 분리배양
① LB 배지 뒷면에 시료 이름을 적는다.
② 알코올 램프에 불을 붙이고 inoculating loop 머리 부분을 멸균한다.
③ 멸균한 inoculating loop를 식힌 후 E.coli colony하나를 취해 준비한 LB배지에 도말평판법으로 streaking한다.
④ 도말한 LB배지를 37℃ incubator에 넣어 하루 배양한다.
⑤ 다음날 LB배지를 확인한다.

*액체배지의 접종, 분리배양
① 라벨링 테이프에 시료 이름을 적는다.
② 멸균한 inoculating loop로 E.coli colony하나를 취해 준비한 액체배지에 넣는다.
③ 뚜껑을 덮은 액체배지를 37℃ incubator에 넣어 하루 배양한다.
④ 다음날 액체 배지가 혼탁해 졌는지 확인한다.

8. 실험결과 |

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Title
토양균 Streaking

Introduction
미생물학에서 가장 기본적인 순수배양과 도말표본을 만들기 위해서 토양균을 흙에서 분리, 추출하여 배지에 도말하는 방법을 알아보고 배양한다.

Principle & Theory
① 미생물(microorganism)
- 아주 작아 육안으로 관찰할 수 없는 생물에 대한 편의상의 총칭
- 미생물은 대체로 단세포, 세포간의 형태적·기능적 분화가 되어 있지 않아 단세포로도 독립적으로 살아갈 수 있는 생물
- 자연환경 속에서 직접 얻을 수 있지만 수많은 미생물이 섞여있어 필요한 미생물을 얻기 위해서는 분리과정을 거쳐야 함
혹은 기관에서 원하는 종류의 미생물을 분양받을 수 있음
② 토양균(soil bacteria)
- 토양 속에 사는 세균 및 균류의 총칭
- 토양의 물질 순환에 크게 기여함
- 질화 세균, 철 세균, 유황 세균 등은 화학합성을 하고, 고초균, 셀룰로오스 분해균 등은 종속영양을 하면서 토양 속의 유기물을 분해하기도 함.
- 따뜻하고 영양이 풍부한 토양에서 영양을 얻고 영양분을 공급하기도 하면서 흙 속에 생활하지만 현재 모르는 부분이 많음
③ 도말(Smear)
- 박리세포를 글라스에 발라 세포진에 제공하는 표본
- plate에 굳힌 배지에 균액을 스며들게 하여 배양시킬 때 펴 바르는 것도 도말이라고 함
- 단일 colony를 얻기 위해 사용함
- 도말평판법에는 두 가지 방법이 있음
④ 순수배양(pure culture)
- 세균을 한천배지와 같은 배지에서 단일 종의 미생물만이 존재하는 상태에서 배양하는 일, L.파스퇴르와 R.코흐에 의하여 확립된 것
- 어떤 세균, 원생동물, 곰팡이 등의 미생물을 병원체로 확정하거나 연구할 목적으로 순수배양 함
(병원체로 확정하기 위해서는 다른 종류가 혼입되지 않은 상태에서 실험해야함)
- 미생물의 생리학적 연구에서는 연구할 미생물을 순수하게 분리할 필요가 있어 반듯이 사용됨

참고 자료

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최신 미생물실험(오계헌 외 4인 공저),2005,신광문화사 71p 실험11 순수배양기법
http://club.cyworld.com/clubV1/Home.cy/51153857
1조 ppt 발표자료 슬라이드 8번 순수배양, 슬라이드 14,15번 실험기구